雙酚A檢測(cè)液相色譜法

  雙酚A，也稱BPA，是一種廣泛應(yīng)用于塑料制造的化學(xué)物質(zhì)，主要用于生產(chǎn)聚碳酸酯（PC）、環(huán)氧樹脂等多種高分子材料，被廣泛用于生產(chǎn)化工產(chǎn)品和食品相關(guān)產(chǎn)品，如嬰兒奶瓶、餐具、微波爐器皿、食品包裝容器的涂層、飲料瓶以及供水管道等。研究顯示，雙酚A是一類具有雌激素樣活性的內(nèi)分泌干擾物，可能誘發(fā)兒童性早熟或致癌。

  自2011年3月1日起，歐盟成員國(guó)禁止使用含雙酚A的塑料生產(chǎn)嬰兒奶瓶，并從6月1日起禁止進(jìn)口此類塑料嬰兒奶瓶。針對(duì)雙酚A安全性問題，現(xiàn)已將雙酚A檢測(cè)液相色譜法普遍應(yīng)用。

雙酚A檢測(cè)液相色譜法實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：

試劑：甲醇：色譜純

   乙酸、無水乙醇：分析純

   水：超純水（符合實(shí)驗(yàn)室一級(jí)用水）

   雙酚A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度＞99.0%

儀器：LC-10Tvp液相色譜儀

   SPD-10Tvp紫外檢測(cè)器

   手動(dòng)進(jìn)樣閥

   電子天平

   超聲波清洗器

   超純水機(jī)

   恒溫水浴鍋

雙酚A檢測(cè)液相色譜法分析條件：

 色譜柱：C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)

 流動(dòng)相：甲醇+水=75+25

 流速：0.7mL／min

 柱溫：30℃

 檢測(cè)波長(zhǎng)：224nm

  進(jìn)樣量：20μl

 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

  雙酚A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取適量的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇稀釋，配置成濃度為1000μg/ml的雙酚A儲(chǔ)備液。

  雙酚A標(biāo)準(zhǔn)供試液：使用時(shí)用3%乙酸溶液稀釋成濃度為1.0μg/ml的溶液. 

樣品前處理

  稱取5g的樣品，將其剪成5×5mm的小碎片，置于250ml的三角燒瓶中，加入100mL的甲醇，50℃下超聲提取2小時(shí)，過濾至250mL雞心瓶，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用5mL水漩渦洗脫，待凈化。

樣品濃縮和凈化

E固相萃取小柱

活化、平衡：10 mL甲醇，10 mL水依次過柱；

上樣：在水到達(dá)小柱上層篩板時(shí)，加入待凈化液；

淋洗：6 mL水合10 mL 30%甲醇水溶液依次淋洗小柱，流出液棄去；

洗脫：6 mL 50%乙腈水溶液洗脫，收集洗脫液。

洗脫液50℃下氮?dú)庵两桑?mL流動(dòng)相溶解，進(jìn)樣分析。

結(jié)果與討論

   由參考文獻(xiàn)可初步將流動(dòng)相定為甲醇與超純水，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：當(dāng)只針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測(cè)試時(shí)，使用純甲醇做流動(dòng)相對(duì)雙酚A的響應(yīng)效果，在檢測(cè)樣品含量時(shí)，我們可發(fā)現(xiàn)，以純甲醇作為流動(dòng)相將會(huì)產(chǎn)生大量的溶劑峰，影響到樣品檢測(cè)結(jié)果，因此我們適當(dāng)?shù)奶砑右欢ū壤乃档土鲃?dòng)相的洗脫能力，以避開溶劑峰的影響。由于3%的乙酸溶劑峰較大，因此將甲醇：水=75：25的流動(dòng)相作為*流動(dòng)相，其中可根據(jù)不同樣品的性質(zhì)我們也可靈活利用色譜條件。

   波長(zhǎng)的選擇: 經(jīng)過二級(jí)陣列管檢測(cè)器全波段掃描可知：雙酚A在200nm至400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有三個(gè)zui大吸收峰，分別為200nm、224nm、280nm，由于考慮到流動(dòng)相的影響，200nm在流動(dòng)相甲醇的截至波長(zhǎng)（210nm）內(nèi)因此不予考慮，而雙酚A在224nm處的響應(yīng)度比在280nm處的響應(yīng)度高，因此將*波長(zhǎng)選定為224nm。

陰性和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

  不加入樣品，加入試劑，按樣品處理方法進(jìn)行測(cè)定，在組分相應(yīng)保留時(shí)間處沒有吸收；適當(dāng)?shù)母纳V條件中的流速、流動(dòng)相比例、色譜柱品牌檢測(cè)，均能符合相應(yīng)的參數(shù)條件；其中取標(biāo)樣10μl進(jìn)樣檢測(cè)，雙酚A的理論板數(shù)大于7000。

 精密度和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

  取雙酚A標(biāo)準(zhǔn)供試液，進(jìn)樣6針，每次10ul，進(jìn)行測(cè)定，考察該組分精密度及重現(xiàn)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，精密度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.49%，重現(xiàn)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.095%。

線性關(guān)系和檢測(cè)限

  在本方法確定的色譜條件下，雙酚A濃度為0.1008ug/ml-1008.2ug/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，其峰面積-濃度的線性方程為：y = 10.537x+14.293，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999；在 S/N =3的條件下，本方法zui低檢測(cè)限為0.038mg/kg。

 回收率試驗(yàn)

  采用在實(shí)際樣品中加入不同添加水平的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液的方式進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，按前處理方法處理后分析，采用外標(biāo)法定量，每個(gè)添加水平單獨(dú)測(cè)3次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其平均回收率為85.78%～98.12%，RSD為397％～6.63％。